سلام! من به عنوان تأمین کننده FMOC - او - AIB - OH TFA ، من به دلیل تصفیه آن به دنیای کروماتوگرافی فاز معکوس غواصی می کنم. کروماتوگرافی معکوس - فاز یک روش به روش در فرایند تصفیه است ، اما درست گرفتن آن می تواند کمی چالش باشد. در این وبلاگ ، نکاتی را در مورد نحوه بهینه سازی این روند به اشتراک می گذارم.
اول از همه ، بیایید اصول را درک کنیم. کروماتوگرافی معکوس - فاز ترکیبات را بر اساس آبگریز آنها جدا می کند. در مورد FMOC - او - AIB - OH TFA ، ما می خواهیم آن را از ناخالصی های دیگر به طور مؤثر جدا کنیم. فاز ثابت در کروماتوگرافی فاز معکوس معمولاً مانند ستون C18 آبگریز است و فاز متحرک ترکیبی از حلالهای قطبی مانند آب و حلال های آلی مانند استونیتریل یا متانول است.
انتخاب ستون سمت راست
انتخاب ستون بسیار مهم است. برای FMOC - او - AIB - OH TFA ، یک ستون C18 با کیفیت بالا اغلب گزینه عالی است. طول و قطر ستون نیز. یک ستون طولانی تر می تواند جدایی بهتری را فراهم کند اما ممکن است زمان تجزیه و تحلیل را افزایش دهد. از طرف دیگر ، یک ستون کوتاه تر می تواند روند را سرعت بخشد اما ممکن است وضوح وضوح را فدا کند.
هنگامی که من برای اولین بار با تصفیه FMOC - او - AIB - OH TFA شروع کردم ، با ستون های مختلف C18 آزمایش کردم. برخی از ستون ها بار کربن بالاتری داشتند ، به این معنی که آنها آبگریز تر بودند. این برای حفظ ناخالصی های آبگریز بسیار عالی بود ، اما من باید مراقب باشم که FMOC - او - AIB - OH TFA را حفظ نکنم.
نکته دیگری که باید در نظر بگیرید ، اندازه ذرات بسته بندی ستون است. اندازه ذرات کوچکتر به طور کلی وضوح بهتری را ارائه می دهد اما می تواند فشار خون در سیستم را افزایش دهد. بنابراین ، شما باید بر اساس قابلیت های سیستم کروماتوگرافی خود تعادل پیدا کنید.
بهینه سازی مرحله تلفن همراه
فاز موبایل مانند "حامل" است که ترکیب شما را از طریق ستون حرکت می دهد. نسبت آب به حلال آلی یک عامل اصلی است. برای fmoc - او - aib - oh tfa ، اغلب از شستشوی شیب استفاده می شود. این بدان معنی است که با درصد بالاتر آب شروع می شود و به تدریج درصد حلال آلی را افزایش می دهد.
من معمولاً با یک فاز متحرک شروع می کنم که حدود 90 ٪ آب و 10 ٪ استونیتریل است. این اجازه می دهد تا ناخالصی های قطبی تر ابتدا به پایان برسد. با افزایش درصد استونیتریل ، FMOC - AIB - OH TFA شروع به حرکت از طریق ستون می کند. میزان افزایش درصد حلال ارگانیک مهم است. اگر خیلی سریع آن را افزایش دهم ، ممکن است جدایی به اندازه کافی خوب نباشد ، و FMOC - AIB - OH TFA ممکن است با برخی ناخالصی ها بیرون بیاید. اگر خیلی آهسته آن را افزایش دهم ، زمان تجزیه و تحلیل بسیار طولانی خواهد بود.
pH فاز موبایل نیز نقش دارد. FMOC - او - AIB - OH TFA دارای گروه های عملکردی اسیدی و اساسی است ، بنابراین تنظیم pH می تواند بار و آبگریز خود را تغییر دهد. من اغلب برای کنترل pH از بافر مانند بافر فسفات استفاده می کنم. pH در حدود 2 - 3 معمولاً یک نقطه شروع خوب است ، زیرا می تواند به پروتونات گروه های اصلی کمک کند و ترکیب را آبگریز تر کند.
کنترل دما
دما می تواند بر جداسازی در کروماتوگرافی فاز معکوس تأثیر بگذارد. به طور کلی ، افزایش دما می تواند ویسکوزیته فاز متحرک را کاهش دهد ، که می تواند منجر به زمان شستشوی سریعتر شود. با این حال ، همچنین می تواند رفتار احتباس ترکیبات را تغییر دهد.
برای fmoc - او - aib - oh tfa ، فهمیدم که دمای حدود 25 تا 30 درجه سانتیگراد به خوبی کار می کند. در این دما ، جدایی خوب است و زمان تجزیه و تحلیل منطقی است. اگر درجه حرارت خیلی زیاد باشد ، ترکیب ممکن است تخریب شود و اگر خیلی کم باشد ، ممکن است جدایی به اندازه کارآمد نباشد.
تهیه نمونه
آماده سازی نمونه مناسب ضروری است. من همیشه مطمئن هستم که نمونه FMOC - AIB - OH TFA را در یک حلال مناسب حل می کنم. مخلوطی از آب و حلال آلی مورد استفاده در فاز متحرک اغلب انتخاب خوبی است. این کمک می کند تا اطمینان حاصل شود که نمونه با فاز تلفن همراه سازگار است و می تواند به آرامی به سیستم کروماتوگرافی تزریق شود.
من همچنین نمونه را قبل از تزریق فیلتر می کنم تا هر ماده ذرات را از بین ببرد. این می تواند از گرفتگی ستون جلوگیری کرده و از سیستم کروماتوگرافی محافظت کند. یک فیلتر میکرون 0.22 - برای این منظور معمولاً کافی است.
نظارت و اعتبار سنجی
در طی فرآیند تصفیه ، نظارت بر کروماتوگرام مهم است. من از یک ردیاب UV برای نظارت بر شستشوی ترکیبات استفاده می کنم. FMOC - او - AIB - OH TFA دارای اوج جذب اشعه ماوراء بنفش مشخصه است که به من امکان می دهد پیشرفت آن را از طریق ستون پیگیری کنم.
بعد از تصفیه ، نتایج را تأیید می کنم. من از تکنیک هایی مانند طیف سنجی جرمی برای تأیید هویت FMOC خالص شده - HIS - AIB - OH TFA و کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) استفاده می کنم. اگر خلوص به علامت نرسد ، به عقب برمی گردم و پارامترهای کروماتوگرافی را تنظیم می کنم.
ترکیبات و پیوندهای مرتبط
به هر حال ، اگر به ترکیبات مرتبط علاقه دارید ، بررسی کنیدOctadecanedioic Acid Mono - Tert - Butyl Esterباtbuo - he - gal (aoe - aoe) - otbueوتfmoc - thr (tbu) - Phe - OHبشر این ترکیبات در صنعت داروسازی نیز مهم هستند و ممکن است مربوط به تحقیق یا تولید شما باشد.
پایان
بهینه سازی کروماتوگرافی فاز معکوس - برای تصفیه FMOC - HIS - AIB - OH TFA فرایندی است که نیاز به صبر و آزمایش دارد. با انتخاب دقیق ستون ، بهینه سازی فاز موبایل ، کنترل دما ، تهیه صحیح نمونه ، و نظارت و اعتبارسنجی نتایج ، می توانید به تصفیه با کیفیت بالا برسید.
اگر در بازار FMOC هستید - AIB - OH TFA یا سؤالی در مورد روند تصفیه دارید ، دریغ نکنید که برای بحث تهیه تهیه کنید. ما در اینجا هستیم تا به شما کمک کنیم تا بهترین محصول را برای نیازهای خود بدست آورید.
منابع
- Snyder ، LR ، Kirkland ، JJ ، & Glajch ، JL (2010). توسعه روش HPLC عملی. جان ویلی و پسران.
- مک مستر ، MC (2006). HPLC برای دانشمندان دارویی. ویلی - بینابینی.